ক্ষারীয় প্রোটিজ

প্রয়োগ এবং নীতি

এই ক্ষারীয় প্রোটেসটি ব্যাকিলাস সাবটিলিস ভার থেকে প্রাপ্ত প্রস্তুতির পিসি ইউনিট হিসাবে প্রকাশিত প্রোটেস ক্রিয়াকলাপ নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়। এবং ব্যাসিলাস লাইকেনিফর্মিস ভ। খালি 37 ° এবং পিএইচ 7.0 এ কেসিনের 30 মিনিটের প্রোটোলিটিক হাইড্রোলাইসের উপর ভিত্তি করে রয়েছে। আনহাইড্রোলাইজড কেসিন পরিস্রাবণ দ্বারা সরানো হয়, এবং দ্রবীভূত কেসিন স্পেকট্রোফোটোমেট্রিকভাবে নির্ধারিত হয়।

ক্ষারীয় প্রোটিজের রেজেন্টস এবং সমাধান
কেসিন হামারস্টেন-গ্রেড কেসিন ব্যবহার করুন (মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রের বায়োকেমিক্যাল কর্পোরেশন, ক্যাটালগ নং 12840 বা সমমান)।
ট্রিস বাফার (পিএইচ 7.0) 12.1 গ্রাম এনজাইম-গ্রেড (বা সমমানের) ট্রিস (হাইড্রোক্সিমিথাইল) অ্যামিনোমেথেন 800 মিলি জলের মধ্যে দ্রবীভূত করুন এবং 1 এন হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিডের সাথে পিএইচ 7.0 তে টাইট্রেট করুন। 1000-এমএল ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্কে স্থানান্তর করুন, জলের সাথে ভলিউমে মিশ্রিত করুন এবং মিশ্রণ করুন।
টিসিএ সলিউশন এক 1000-এমএল ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্কে 800 মিলি জলে ট্রাইক্লোরোসেটিক অ্যাসিড 18 গ্রাম এবং সোডিয়াম অ্যাসিটেট ট্রাইহাইড্রেট দ্রবীভূত করুন, 20 মিলি গ্লিশিয়াল এসিটিক অ্যাসিড যোগ করুন, পানির সাথে পরিমাণে মিশ্রিত করুন এবং মিশ্রণ করুন।
সাবস্ট্রেট সলিউশন 500 মিলিলিটার জলে 6.55 গ্রাম এনজাইম-গ্রেড ট্রিস (হাইড্রোক্সিমিথিল) অ্যামিনোমেথান দ্রবীভূত করুন, 1 এন হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিডের 8 এমএল যোগ করুন এবং মিশ্রণ করুন। এই দ্রবণটিতে কেসিনের 7 গ্রাম দ্রবীভূত করুন এবং একটি ফুটন্ত পানির স্নানে 30 মিনিটের জন্য উত্তাপ করুন, মাঝে মাঝে আলোড়ন দিন।
কক্ষের তাপমাত্রা শীতল করুন এবং কেসিনের বৃষ্টিপাত রোধ করতে 0.2 এন হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিডের সাথে পিএইচ 7.0 কে সামঞ্জস্য করুন, ধীরে ধীরে এসিড যুক্ত করুন ig মিশ্রণটি 1000-এমএল ভলিউম্যাট্রিক ফ্লাস্কে স্থানান্তর করুন, জলের সাথে ভলিউমে মিশ্রিত করুন এবং মিশ্রণ করুন।

নমুনা প্রস্তুতি ট্রিস বাফার ব্যবহার করে, নমুনা এনজাইম প্রস্তুতির একটি সমাধান প্রস্তুত করুন যাতে চূড়ান্ত পাতন 2 মিলি থেকে 10 থেকে 44 ব্যাকটিরিয়া প্রোটেস ইউনিট থাকে will

ক্ষারীয় প্রোটেসের পদ্ধতি
প্রতিটি এনজাইম পরীক্ষার জন্য একটি টিউব, প্রতিটি এনজাইম ফাঁকা জন্য একটি টিউব, এবং একটি স্তর ফাঁকা জন্য একটি টিউব অনুমতি দিয়ে 25- × 150 মিমি পরীক্ষার টিউবগুলির প্রতিটিতে সাবস্ট্রেট সলিউশনের পিপেট 10.0 এমএল করে। 37 ° ± 0.1 at বজায় রাখা জল স্নানে 15 মিনিটের জন্য টিউবগুলিকে একত্রে সামঞ্জস্য করুন °
শূন্য সময়ে স্টপওয়াচটি শুরু করে, দ্রুত সমান্তরাল স্তরটিতে নমুনা প্রস্তুতির ২.০ এমএল পিপেট করুন। জল স্নানের মধ্যে টিউবগুলি মিশ্রিত করুন এবং প্রতিস্থাপন করুন। সাবস্ট্রেট ফাঁকাতে 2 মিলি ট্রিল বাফার (নমুনা প্রস্তুতির পরিবর্তে) যুক্ত করুন। ঠিক 30 মিনিটের পরে, প্রতিটি এনজাইম ইনকিউবেশনটিতে 10 এমএল টিসিএ সলিউশন যুক্ত করুন এবং প্রতিক্রিয়া বন্ধ করতে সাবস্ট্রেট ফাঁকাতে দিন। প্রোটিন পুরোপুরি জমাট বাঁধার জন্য 30 মিনিটের জন্য জল স্নানের মধ্যে টিউবগুলি গরম করুন।
দ্বিতীয় উত্তাপের সময় শেষে, প্রতিটি টিউবটি দৃig়ভাবে কাঁপুন এবং 11 সেন্টিমিটার হোয়াটম্যান নং 42, বা সমতুল্য ফিল্টার পেপারের মাধ্যমে ফিল্টার করুন, ফিল্টার্রেটের প্রথম 3 এমএল ছাড়িয়ে।
[দ্রষ্টব্য: পরিস্রাবণ অবশ্যই নিখুঁতভাবে পরিষ্কার হওয়া উচিত]]
উপকরণ শূন্য থেকে ফিল্টারট ব্যবহার করে শূন্যে সেট করতে একটি উপযুক্ত স্পেকট্রোফোটোমিটার সহ, 1-সেমি কোষে প্রতিটি স্যাম্পল ফিল্টারেটের শোষণ নির্ধারণ করুন। যথাযথ এনজাইম ফাঁকা পাঠকে বিয়োগ করে প্রতিটি পাঠ সংশোধন করুন এবং এটি হিসাবে প্রাপ্ত মানটি রেকর্ড করুন।

স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ ট্রান্সফার 100-মিলিগ্রাম এল-টাইরোসিন, ক্রোমাটোগ্রাফিক-গ্রেড বা সমমানের (অ্যালড্রিক কেমিক্যাল কোং), যা আগে ধীরে ধীরে ওজনে শুকানো হয় 1000-এমএল ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্কে। 0.1 এন হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিডের 60 এমএল দ্রবীভূত করুন। সম্পূর্ণরূপে দ্রবীভূত হয়ে গেলে, জলটি দিয়ে ভলিউমের দ্রবণটি পাতলা করুন এবং ভালভাবে মিশ্রিত করুন। এই দ্রবণটিতে 1.0 মিলিটারে 100 µg টাইরোসিন থাকে। এই স্টক সমাধান থেকে প্রতি এমএল 75.0, 50.0, এবং 25.0 µg টায়রোসিন ধারণ করতে আরও তিনটি dilations প্রস্তুত করুন। ০.০০6 এন হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিডের বিপরীতে উপযুক্ত স্পেকট্রোফোটোমিটারের উপর 1-সেমি কোষে 275 এনএম চারটি সমাধানের শোষণ নির্ধারণ করুন। শোষণ বনাম টাইরোসিন ঘনত্বের একটি প্লট প্রস্তুত করুন।

ক্ষারীয় প্রোটিজের গণনা
একটি ব্যাকটিরিয়া প্রোটেস ইউনিট (পিসি) এনজাইমের সেই পরিমাণ হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয় যা পার্শ্বের শর্তাবলী অনুযায়ী প্রতি মিনিটে এল-টাইরোসিনের 1.5 1.5g / mL এর সমতুল্য উত্পাদন করে।
স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ থেকে এবং ইন্টারপোলেশন দ্বারা, 60 µg / এমএল এর টাইরোসিন ঘনত্বযুক্ত সমাধানের শোষণকে নির্ধারণ করুন। 0.0115 এর কাছাকাছি একটি চিত্র পাওয়া উচিত। 1.5 ডিগ্রি / এমএল এর টাইরোসিন ঘনত্বযুক্ত সমাধানের সমতুল্য শোষণ প্রাপ্ত করতে 40 দ্বারা বিভক্ত মানকে ভাগ করুন এবং এএস হিসাবে প্রাপ্ত মানটি রেকর্ড করুন।
সমীকরণ দ্বারা নমুনা এনজাইম প্রস্তুতির কার্যকলাপ গণনা করুন

পিসি / জি = (এউ / এএস) × (22/30 ডাব্লু)

যার মধ্যে 22 টি এমএল এর, প্রতিক্রিয়া মিশ্রণের চূড়ান্ত পরিমাণ হয়; 30 সময়, মিনিটের মধ্যে, প্রতিক্রিয়া সময়; এবং ডাব্লু হ'ল জি-তে, নেওয়া আসল নমুনার of

ক্ষারীয় প্রোটিজের প্যাকেজিং এবং স্টোরেজ

সলিড ফুড প্যাকেজিং ব্যাগ, 25 কেজি / ব্যারেল।

ক্ষারীয় প্রোটিজটি রোদ, তাপ থেকে দূরে শুকনো, শীতল এবং ভাল বায়ুচলাচল জায়গায় সংরক্ষণ করা উচিত।

অর্থ প্রদান:টি / টি, পেপাল, ওয়েস্টার্ন ইউনিয়ন, আলিবাবা বাণিজ্য আশ্বাস, ভিসা, মাস্টারকার্ড, ই-চেকিং, পরে প্রদান করুন, এলসি এবং অন্যান্য