ফাইটেস

ফাইটেসের প্রয়োগ ও মূলনীতি

এই পদ্ধতিটি ফাইটেট থেকে ফসফেট প্রকাশের এনজাইমগুলির কার্যকলাপ নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়। অ্যাসো সোডিয়াম ফাইটেটের এনজাইমেটিক হাইড্রোলাইসিসের উপর ভিত্তি করে নিয়ন্ত্রণ করা শর্তে অर्थো ফসফেটের পরিমাণ পরিমাপ করে controlled

রিএজেন্টস এবং সমাধান 
[দ্রষ্টব্য: ফসফেটের অনুপস্থিতি নিশ্চিত করতে সমস্ত গ্লাসওয়্যারকে অবশ্যই অ্যাসিড ধুয়ে, ধুয়ে ফেলা উচিত এবং জালিয়াতিপূর্ণভাবে পরিষ্কার করা উচিত]]
অ্যাসিটেট বাফার (পিএইচ 5.5) 100% এসিটিক অ্যাসিড (সি 2 এইচ 4 ও 2) এর 1.76 গ্রাম, সোডিয়াম অ্যাসিটেট ট্রাইহাইড্রেট (C2H3O2Na · 3H2O) এর ০.০ g গ্রাম এবং ক্যালসিয়াম ক্লোরাইড ডিহাইড্রেট প্রায় 900 মিলি জলে দ্রবীভূত করুন। সমাধানটি 1000-এমএল ভলিউম্যাট্রিক ফ্লাস্কে স্থানান্তর করুন, পানির সাথে ভলিউমে মিশ্রিত করুন এবং মিশ্রণ করুন। পিএইচ 5.50 ± 0.05 হওয়া উচিত।
সাবস্ট্রেট সলিউশন অ্যাসিটেট বাফারের 900 মিলি পরিমাণে সোডিয়াম ফাইটেট ডেকাহাইড্রেট (সি 6H6O24P6Na12 · 10H2O) (সিগমা কেমিক্যাল কোং) এর 8.40 গ্রাম দ্রবীভূত করুন। 4 এম এসিটিক অ্যাসিড যুক্ত করে 37.0 ± ± 0.1 at এ পিএইচ 5.50 ± 0.05 তে সামঞ্জস্য করুন। পরিবেষ্টনের তাপমাত্রা থেকে শীতল। পরিমাণমতো মিশ্রণটি 1000-এমএল ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্কে স্থানান্তর করুন, অ্যাসিটেট বাফার দিয়ে ভলিউমে মিশ্রিত করুন এবং মিশ্রণ করুন। প্রতিদিন তাজা প্রস্তুত।
নাইট্রিক অ্যাসিড সলিউশন (২ stir%) নাড়াচাড়া করার সময় আস্তে আস্তে m০% নাইট্রিক অ্যাসিডের ১৫০ মিলিটার পানিতে মিশ্রিত করুন।
অ্যামোনিয়াম হেপাটোলিলেডেট সলিউশন 1000 মিলি এমএল ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্কে 900 মিলি পানিতে অ্যামোনিয়াম হেপাটামোলিবেডেট টেট্রাহাইড্রেট [(এনএইচ 4) 6 এমও 7 ও 24 · 4 এইচ 2 ও] দ্রবীভূত করুন। 25% অ্যামোনিয়া দ্রবণের 10 মিলি মিশ্রণ যুক্ত করুন, পানির সাথে ভলিউমে মিশ্রিত করুন এবং মিশ্রণ করুন। এই দ্রবণটি 4 ঘন্টা স্থিতিশীল থাকে যখন পরিবেষ্টিত তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয় এবং আলো থেকে রক্ষা করা হয়।
অ্যামোনিয়াম ভানাডেট সলিউশন 400 মাইল উষ্ণ (60 °) জলে অ্যামোনিয়াম মনোভানাডেট (এনএইচ 4 ভিও 3) এর 2.35 গ্রাম দ্রবীভূত করুন। আলোড়ন দেওয়ার সময় আস্তে আস্তে 20 মিলি নাইট্রিক এসিড সলিউশন (27%) যুক্ত করুন। পরিবেষ্টনের তাপমাত্রা থেকে শীতল। পরিমাণমতো মিশ্রণটি 1000-এমএল ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্কে স্থানান্তর করুন, জল দিয়ে ভলিউমে মিশ্রিত করুন এবং মিশ্রণ করুন। এই দ্রবণটি 4 ঘন্টা স্থিতিশীল থাকে যখন পরিবেষ্টিত তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয় এবং আলো থেকে রক্ষা করা হয়।
সমাধান / রঙ বন্ধ করুন আলোড়নকালে, অ্যামোনিয়াম ভ্যানেটেট সলিউশনের 250 মিলি এমোনিয়াম হেপটামোলিবিডেট সলিউশনকে 250 মিলি মিশ্রণ করুন। ধীরে ধীরে 65% নাইট্রিক অ্যাসিডের 165 মিলি যুক্ত করুন। পরিবেষ্টনের তাপমাত্রা থেকে শীতল। পরিমাণমতো মিশ্রণটি 1000-এমএল ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্কে স্থানান্তর করুন, জল দিয়ে ভলিউমে মিশ্রিত করুন এবং মিশ্রণ করুন। প্রতিদিন তাজা প্রস্তুত।
পটাসিয়াম ডাইহাইড্রোজেন ফসফেট সলিউশন পর্যাপ্ত পরিমাণে পটাসিয়াম ডাইহাইড্রোজেন ফসফেট (কেএইচ 2 পিও 4) ভ্যাকুয়াম ওভেনে 100 ° থেকে 104 at 2 ঘন্টা এর জন্য শুকিয়ে নিন। শুকনো সিলিকা জেল ধরে একটি ডেসিকেটরেটারে পরিবেষ্টনের তাপমাত্রা থেকে শীতল।
ডুপ্লিকেট (সমাধান এ এবং বি) এর মধ্যে শুকনো পটাসিয়াম ডাইহাইড্রোজেন ফসফেটের প্রায় 0.245 গ্রাম ওজনের পরিমাণ 1 মিলিগ্রামের মধ্যে নির্ভুলভাবে ওজন করতে হবে এবং পটাসিয়াম ডাইহাইড্রোজেন ফসফেটের 1.80 মিমি / এল সমেত সমাধান পেতে অ্যাসিটেট বাফারকে 1 এল করতে মিশ্রিত করুন।
ফাইটাজ রেফারেন্স প্রস্তুতি (উচ্চতর কেন্দ্রীভূত ফাইটেজ প্রস্তুতি) এই প্রস্তুতিটি একটি নির্ধারিত ক্রিয়াকলাপের (সহযোগী সহযোগী দ্বারা) জিসট-ব্রোকাডেস, ডেলফ্ট, নেদারল্যান্ডসের কাছ থেকে নেওয়া যেতে পারে, বা রেফারেন্স প্রস্তুতির ক্রিয়াকলাপটি পদ্ধতি 2 অনুযায়ী নির্ধারণ করা যেতে পারে।
ফাইটাজ রেফারেন্স সলিউশন, প্রক্রিয়া 1 200,000 এমএল ভলিউমেট্রিক ফ্লাস্কে ডুপ্লিকেট হিসাবে 1 মিলিগ্রামের মধ্যে সঠিকভাবে 20,000 ফাইট্যাস ইউনিট সহ ফাইটেজ রেফারেন্স প্রস্তুতির পরিমাণ ওজন করতে হবে। অ্যাসিটেট বাফার দিয়ে ভলিউম দ্রবীভূত করুন এবং মিশ্রণ করুন। চূড়ান্ত দুর্বলতার ২.০ মিলিলিটার প্রতি প্রায় 0.01, 0.02, 0.04, 0.06, এবং 0.08 ফাইটেস ইউনিট যুক্ত ডিলিউশনগুলি পেতে অ্যাসিটেট বাফারের সাথে পাতলা করুন।
নমুনা প্রস্তুতি, পদ্ধতি 1 এসিটেট বাফারে নমুনার পরিমাণ ওজনে স্থগিত বা দ্রবীভূত করতে এবং নির্ভুলভাবে মিশ্রণ করতে পারে যাতে চূড়ান্ত পাতনটির 2.0 মিলি 0.02 থেকে 0.08 ফাইটেস ইউনিট থাকে।

নমুনা প্রস্তুতি, পদ্ধতি 2 অনুলিপিতে, সঠিকভাবে পরিমাণে ফাইটেস রেফারেন্স প্রস্তুতির পরিমাণ ওজন করুন এবং চূড়ান্ত দুর্বলতার প্রতি 2.0 এমএল প্রতি 0.06 ± 0.006 ফাইটেস ইউনিট ধারণকারী মিশ্রণ পেতে অ্যাসিটেট বাফারে দ্রবীভূত এবং মিশ্রণ করুন।

পদ্ধতিগুলি
প্রক্রিয়া 1 (ফাইটেজ ক্রিয়াকলাপ নির্ধারণ) নমুনা প্রস্তুতি, পদ্ধতি 1 এবং 2. ফাইটেস রেফারেন্স সলিউশন, প্রক্রিয়া 1 এর 2.00 এমএল পৃথক 20- × 150-মিমি গ্লাস পরীক্ষার টিউবগুলিতে স্থানান্তর করুন। স্টপওয়াচ ব্যবহার করে এবং সময় শুরু করা শূন্যের সমান, সিরিজের ক্রম অনুসারে এবং নিয়মিত সময়ের ব্যবধানের মধ্যে, টিউবগুলিকে একটি 37.0 ° ± 0.1 ° জল স্নানের মধ্যে রাখুন এবং তাদের সামগ্রীগুলি 5 মিনিটের জন্য সামঞ্জস্য করার অনুমতি দিন। সময়টি সিরিজের একই ক্রমে এবং একই সময়ের ব্যবধানের সাথে 5 মিনিটের সমান হয়, প্রতিটি পরীক্ষার নলটিতে সাবস্ট্রেট সলিউশন (পূর্বে 37.00 ± 0.10 এর সমতুল্য) এর 4.0 মিলিলিটার যোগ করুন। মিশ্রিত করুন, এবং প্রতিস্থাপন 37.0 ± ° 0.1 ° জল স্নান। সময়ে একই ক্রমে এবং একই সময়ের ব্যবধানের মধ্যে 65 মিনিটের সমান, কালার / স্টপ সলিউশন এর 4.0 এমএল যোগ করে ইনকিউবেশনটি সমাপ্ত করুন। মিশ্রিত করুন এবং পরিবেষ্টনের তাপমাত্রায় শীতল করুন।
নমুনা প্রস্তুতি, প্রক্রিয়া 1 এর 2.00 এমএল এবং ফাইটেস রেফারেন্স সলিউশন, প্রক্রিয়া 1 পৃথক 20- × 150-মিমি গ্লাস পরীক্ষার টিউবগুলিতে স্থানান্তর করে ফাঁকা প্রস্তুত করুন। স্টপ ওয়াচ ব্যবহার করে এবং সময় শুরু করা শূন্যের সমান হয়, সিরিজের ক্রম অনুসারে এবং নিয়মিত সময়ের ব্যবধানের মধ্যে, টিউবগুলিকে একটি 37.0 ° ± 0.1 ° জল স্নানের মধ্যে রাখুন এবং 5 মিনিটের জন্য তাদের সামঞ্জস্য করার অনুমতি দিন। একই সময়ে 5 মিনিটের সমান, একই ক্রমের ক্রম এবং একই সময়ের ব্যবধানের মধ্যে, রঙিন / স্টপ সমাধানের 4.0 মিলি যোগ করুন। মিশ্রিত করুন এবং পরিবেষ্টনের তাপমাত্রায় শীতল করুন। এর পরে ফাঁকা টিউবগুলিতে সাবস্ট্রেট সলিউশনটির 4.00 এমএল যোগ করুন এবং মিশ্রণ করুন।
3000। G এ 5 মিনিটের জন্য সমস্ত পরীক্ষার টিউব কেন্দ্রীভূত করুন। উপকরণ শূন্য করতে জল ব্যবহার করে উপযুক্ত স্পেকট্রফোটোমিটার সহ 1 সেন্টিমিটার পথ দৈর্ঘ্যের কক্ষের 415 এনএম এ প্রতিটি দ্রবণের শোষণ নির্ধারণ করুন।
পদ্ধতি 2 (ফাইটাজ রেফারেন্স প্রস্তুতির ফাইটাজ ক্রিয়াকলাপ নির্ধারণ) নমুনা প্রস্তুতির 2.00 এমএল, পদ্ধতি 2, এবং 2.00 এমএল (পটাসিয়াম ডাইহাইড্রোজেন ফসফেট সলিউশন এ থেকে তিন বার এবং বি থেকে দুবার) পৃথক 20 তে স্থানান্তর করুন - × 150 মিমি গ্লাস পরীক্ষা টিউব। স্টপওয়াচ ব্যবহার করে এবং সময় শুরু করা শূন্যের সমান, সিরিজের ক্রম অনুসারে এবং নিয়মিত সময়ের ব্যবধানের মধ্যে, টিউবগুলিকে একটি 37.0 ° ± 0.1 ° জল স্নানের মধ্যে রাখুন এবং তাদের সামগ্রীগুলি 5 মিনিটের জন্য সামঞ্জস্য করার অনুমতি দিন। সময়টি সিরিজের একই ক্রমে এবং একই সময়ের ব্যবধানের মধ্যে 5 মিনিটের সমান হয়, টেস্ট টিউবগুলিতে সাবস্ট্রেট সলিউশন (পূর্বে 37.0 ± ± 0.1 to এর সাথে সংশ্লেষিত) এর 4.0 মিলিলিটার যোগ করুন। মিশ্রিত করুন, এবং প্রতিস্থাপন 37.0 ± ° 0.1 ° জল স্নান। সময়ে একই ক্রমে এবং একই সময়ের ব্যবধানের মধ্যে 35 মিনিটের সমান, কালার / স্টপ সলিউশন এর 4.0 এমএল যোগ করে ইনকিউবেশনটি সমাপ্ত করুন। মিশ্রিত করুন এবং পরিবেষ্টনের তাপমাত্রায় শীতল করুন।

নমুনা প্রস্তুতির 2.00 এমএল, প্রক্রিয়া 2 পৃথক 20- × 150-মিমি গ্লাস পরীক্ষার টিউবগুলিতে স্থানান্তর করে ফাঁকা প্রস্তুত করুন। পাঁচটি পৃথক পৃথক 20- × 150-মিমি গ্লাস টেস্ট টিউবগুলির একটি সিরিজে 2.00 এমএল জল স্থানান্তর করে রিএজেন্ট ফাঁকাগুলি প্রস্তুত করুন। সমস্ত ফাঁকা টিউবগুলিতে 4.0 মিলিলিটার রঙ / স্টপ সলিউশন যুক্ত করুন এবং মিশ্রণ করুন। এরপরে সাবস্ট্রেট সলিউশনটির 4.0 মিলি মিশ্রণটি মিশ্রণ করুন। উপকরণ শূন্য করতে জল ব্যবহার করে উপযুক্ত স্পেকট্রফোটোমিটার সহ 1 সেন্টিমিটার পথ দৈর্ঘ্যের কক্ষের 415 এনএম এ প্রতিটি দ্রবণের শোষণ নির্ধারণ করুন।

গণনা
গণনা, পদ্ধতি 1 ওয়ান ফাইটাজ (ফাইটেজ) ইউনিট (এফটিইউ) হ'ল এনজাইমের পরিমাণ যা পরীক্ষার শর্ত অনুসারে পিএইচ 5.50 এ সোডিয়াম ফাইটেট 0.0051 মোল / এল থেকে 1.00 minmol / মিনিটে অজৈবনিক ফসফেটকে মুক্ত করে। প্রতিটি নমুনা প্রস্তুতি এবং ফাইটাজ রেফারেন্স সমাধানের জন্য সংশোধিত শোষণ (নমুনা বিয়োগ ফাঁকা) গণনা করুন। সংশ্লিষ্ট শোষণের বিরুদ্ধে প্রতিটি ফাইটাজ রেফারেন্স সলিউশনটির নির্ভুল গণনা করা ফাইটাজ ক্রিয়াকলাপ (প্রতি 2 এমএল প্রতি FTU) প্লট করুন। বক্ররেখা থেকে, প্রতিটি নমুনা প্রস্তুতিতে ফাইটাস ক্রিয়াকলাপ নির্ধারণ করুন (প্রতি 2 এমএল এফটিইউ):

ক্রিয়াকলাপ (এফটিইউ / জি) = (এফটিইউ প্রতি 2 এমএল il হ্রাস) / নমুনা ওজন (ছ)।


গণনা, পদ্ধতি 2 প্রতিটি নমুনা প্রস্তুতির জন্য শুষে ফাইটেস রেফারেন্স সলিউশন মাইনাস সংশ্লিষ্ট শোষণ ফাঁকা) এবং প্রতিটি পটাসিয়াম ডাইহাইড্রোজেন ফসফেট সলিউশন, এপি (শোষণ পটাসিয়াম ডাইহাইড্রোজেন ফসফেট সলিউশন বিয়োগ গড় শোষণ পুনরায়ত ফাঁকা) জন্য সঠিক সংশ্লেষ এআর গণনা করুন। সি, প্রতিটি পটাসিয়াম ডাইহাইড্রোজেন ফসফেট সমাধানের ফসফেট ঘনত্ব গণনা করুন:

(ডাব্লু × 1000 × 2) / এমডাব্লু = সি (মিমোল / 2 এমএল)।

পটাসিয়াম ডাইহাইড্রোজেন ফসফেট ওজনের পরিমাণের সংশোধন করার পরে প্রতিটি পটাসিয়াম ডিহাইড্রোজেন ফসফেট সলিউশন এর শোষণগুলি ডি গণনা করুন:

এপি / সি = ডি (শোষণ ইউনিট / প্রতি 2 এমএল ফসফেটের মিমোল)।

E (সর্বোচ্চ অনুমোদিত পার্থক্য, 5%) প্রদান করে ফলাফলের গড় গণনা করুন।
প্রতিটি ফাইটাজ রেফারেন্স প্রস্তুতির জন্য ক্রিয়াকলাপ গণনা করুন:

(এআর × চ) / (30 × আর × ই) = এফটিইউ / জি,

যার মধ্যে ফাইটাস স্ট্যান্ডার্ড সলিউশনটির সংশোধন শোষণের সমান; এফ রেফারেন্স প্রস্তুতির মোট দুর্বলতার কারণের সমান; 30 মিনিটের মধ্যে ইনকিউবেশন সময় সমান; আর নমুনা ওজনের সমান; E ডি ডি ফ্যাক্টরের গড় সমান; ডাব্লু জি এর মধ্যে পটাসিয়াম ডাইহাইড্রোজেন ফসফেটের ওজনের সমান; এবং মেগাওয়াট পটাসিয়াম ডাইহাইড্রোজেন ফসফেটের আণবিক ওজনের সমান, 136.09 (জি / মোল)।

সনদপত্রের বিশ্লেষণ

প্যাকেজিং এবং স্টোরেজ

সলিড ফুড প্যাকেজিং ব্যাগ, 25 কেজি / ব্যারেল।

ফাইটাজ রোদ, তাপ থেকে দূরে শুকনো, শীতল এবং ভাল বায়ুচলাচল জায়গায় সংরক্ষণ করা উচিত।

অর্থ প্রদান:টি / টি, পেপাল, ওয়েস্টার্ন ইউনিয়ন, আলিবাবা বাণিজ্য আশ্বাস, ভিসা, মাস্টারকার্ড, ই-চেকিং, পরে প্রদান করুন, এলসি এবং অন্যান্য